鱼肉中孔雀石绿的检测-分子印迹固相萃取

孔雀石绿(Malachite green，MG）属于三苯甲烷类染料，在水产养殖业上，常作为杀菌剂用于预防和治疗各类水产生物，如鱼卵和鱼体中的鳃霉病，水霉病等。孔雀石绿具有高毒性、高残留、高致癌、致突变等危害，被指定为水生生物禁用药物。我国已宣布了严禁在水产养殖中使用孔雀石绿，并规定其不得检出。

一、样品提取

鱼去鳞、皮，沿背脊取肌肉，粉碎均匀后，取鱼肉试样2 g(精确至0.01 g)，加入2 g NaCl，再加入 15 mL 70%乙腈水，涡旋震荡10 min，超声提取10 min，以10000 r/min转速离心5 min，移取全部上清液至离心管中；将所得的上清液中加入等体积的去离子水，混匀，作为待净化液。

二、样品净化

活化：依次用3.0 mL乙腈和3.0 mL去离子水平衡MISPE柱；

上样和淋洗：移取所得样品提取液过柱，再用3.0 mL的水淋洗，弃去淋洗液；

洗脱：用3.0 mL甲醇-乙酸（9:1，V/V）洗脱，收集洗脱液；

重新溶解：洗脱液经氮吹浓缩至近干，用1.0 mL 乙腈溶解，过0.45 μm有机滤膜，进行上机测定。

注：整个过程控制流速不要超过1 mL/min。

三、 、仪器条件

液相色谱条件

仪器：UltiMate 3000（Thermofisher Scientific）

色谱柱：Agilent C18 (4.6 mm×250 mm，5μm)

流动相：乙腈：50mM乙酸铵(0.1%乙酸)=60:40

检测波长：620 nm

流速：1.2 mL/min

柱温：30 ℃

进样量：20 μL

四、实验结果