决明子中黄曲霉毒素含量检测的免疫亲和柱法

黄曲霉素简介

黄曲霉毒素(AFT)是一种毒性很强的肝毒素, 可引起肝脏的急慢性损害， 同时还对肾脏等其他多种组织器官造成影响, 并具有致癌、致畸、致细胞突变的作用。 ATF广泛存在于玉米、麦类、稻谷等农产品以及坚果、花生和动物饲料中，近年来, 有陆续报道我国中草药材上ATF污染也很严重,。

为此，我国不断扩大对中药材中黄曲霉含量的检测领域，并制定相关检测标准以加强对中药材的质量管控。

黄曲霉毒素总量的测试方法

实验耗材：黄曲霉总量免疫亲和柱

参照标准：《中国药典2015年版第四部》

实验部分

一、样品提取

准确称取5.0 g粉碎后决明子样品置于50mL离心管中，加入1 g氯化钠，加入25 mL 70%甲醇溶液，于涡旋仪上涡旋2min，在5000 r/min下离心5min，取5 mL上清液，用水定容至20 mL，过滤，取10 mL待净化。

二、免疫亲和柱净化

(1) 上样：将20 mL上样器连接于免疫亲和柱上端，取待净化液以1-2滴/秒的速度通过免疫亲和柱，弃掉流出的液体。

(2) 淋洗和洗脱：用20 mL水淋洗柱子，分两次淋洗，弃去流出的液体；抽干小柱；加入2×1 mL甲醇洗脱，抽干小柱，收集洗脱液。

(3) 重新溶解：洗脱液在45℃氮吹至近干，0.5 mL初始流动相复溶，混匀，经0.22 μm滤膜过滤，供上机测试。

三、仪器条件

仪器测试条件（仅供参考）

3.1 液相条件

仪 器：UPLC/MS/MS (Thermo Fiaher TSQ Endura )	进样量： 4 μL
色谱柱：CommaSilTM HILIC(2.1mm×100 mm, 3 μm)	柱 温： 30 ℃
流动相：A：10 mmol/L 乙酸铵溶液 B：乙腈	流 速： 0.3 mL/min

表1 梯度洗脱

时间/min	A%	B%
0	90	10
3	60	40
4.5	55	45
6.5	35	65
10	60	40

3.2质谱条件

离子源：HESI，正离子监测	电喷雾电压：3500 V
鞘气压力：2 arb	辅气压力： 1 arb
离子传输管：275℃	辅气温度：350℃
采集方式： 多反应监测(SIR)

四、实验结果

表2. 决明子中0.02 mg/kg黄曲霉B1,黄曲霉G1和0.007mg/kg黄曲霉B2,黄曲霉G2的添加回收结果

1决明子中的黄曲霉B1

2决明子中的黄曲霉 B2

3决明子中的黄曲霉G1

4决明子中的黄曲霉G2