牛奶中五氯酚残留量检测的固相萃取方法 (MAX)

一、实验目的

本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法，HPLC法作为分析方法，检测牛奶中五氯酚残留量的含量。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。

二、实验目标物

五氯酚钠

三、参考标准

《GB 23200.92-2016 食品安全国家标准 动物源性食品中五氯酚残留量的测定 液相色谱-质谱法》

四、实验材料

 MAX 60mg/3ml

五、实验方法

1、样品提取

准确称取牛奶样品2.0 g，加入10 mL 5%三乙胺的乙腈-水（7:3,v/v）溶液，涡旋混合1 min，超声提取5 min，5000 r/min离心5 min，取上清液待净化。

2、SPE净化

(1)活化：固相萃取柱使用前依次用5 mL甲醇、5 mL 水活化。

(2)上样和洗脱：往固相萃取柱中加入待净化液；依次加入5 mL 5%氨水溶液、5mL甲醇、5mL 2%甲酸的甲醇-水（取4%甲酸甲醇溶液与水等体积混匀）溶液淋洗，弃去流出液；抽干小柱，再加入4 mL 4%甲酸甲醇溶液洗脱，收洗脱液。

(3)重新溶解：洗脱液与40℃氮吹至近干，用1 mL流动相定容，混匀，过0.45um有机微滤膜，供HPLC测试。

3、HPLC条件

设备：Waters Alliance 2695

色谱柱：InertSustain-C18 (4.6 mm×250 mm, 5μm)

检测器：Waters 2996 DAD检测器

检测波长：300 nm

流动相：A：乙腈  B：0.1%磷酸水

洗脱方式：等度洗脱，A:B=75:25

流速：1.0 mL/min

进样体积：20 μL

六、实验结果

1、 0.5 mg/kg牛奶中五氯酚的添加回收结果

表1  0.5 mg/kg牛奶中五氯酚的添加回收结果

2、 添加水平为 0.5 mg/kg牛奶中五氯酚检测的液相色谱图

图1  添加水平为 0.5 mg/kg牛奶中五氯酚检测的液相色谱图